Роль факторов микроокружения.
Механизмы положительной и
отрицательной селекции.
Основные субпопуляции
лимфоцитов.
Цикл 1 – иммунология.
Занятие № 3.
Центральные органы
иммунитета - красный
костный мозг и тимус.
В центральных органах
иммунитета происходит
первый,
антигеннезависимый этап
дифференцировки
лимфоцитов –
то есть «созревание»
уникальных
моноспецифичных
рецепторов.
В костном мозге происходит
образование и
дифференцировка всех
типов клеток крови на
основе
самоподдерживающейся
популяции стволовых
клеток,
дифференцировка Влимфоцитов.
Тимус является «школой
компетентности Тлимфоцитов», в
вилочковую железу
мигрируют пре – Т-клетки
из костного мозга.
ЦЕНТРАЛЬНЫЕ ОРГАНЫ ИММУНИТЕТА
Клетки становятсяиммунокомпетентными – то
есть способными различать
разные молекулы чужеродных
структур.
Эта способность заложена в
геноме лимфоцитов,
присутствия антигенов на
этом этапе не требуется.
В центральных органах
иммунитета формируется
способность клеток
реагировать в будущем (на
периферии) на «чужое» по
принципу: один лимфоцит –
один антиген.
Центральные органы иммунитета: тимус
тимусТИМУСДольчатая структура с эпителиальными клетками стромы и
соединительной тканью
Строма обеспечивает микроокружение для развития и селекции Т
клеток
Снаружи –кора, внутри –мозговой слой, внутри – тимоциты (Тлимфоциты, мигрировавшие из костного мозга)
тимоцит
Эпителиальная
кора
клетка коры
Дендритная
клетка
макрофаг
Мозговой
слой
Эпителиальн
ая клетка
мозгового
слоя
Клетки коры и мозгового вещества тимуса
Тимус - биологические часы: масса тимуса
новорожденные1 – 5 лет
6 – 10 лет
11 – 15 лет
16 – 20 лет
21 – 25 лет
26 – 30 лет
31 – 35 лет
36 – 45 лет
46 – 55 лет
56 – 65 лет
66 – 90 лет
15.15 г
25.6 г
29.4 г
29.4 г
26.2 г
21.0 г
19.5 г
20.1 г
19.0 г
17.3 г
14.3 г
14.06 г
Тимус - биологические часы
Для пожилых характерно:большое число клеток
памяти (встречи со многими
антигенами)
сниженное число наивных
Т-клеток (старение тимуса)
снижение не только числа
наивных Т-клеток, но и
разнообразия репертуара их
Т-клеточных рецепторов
снижение возможности
формирования адекватного
иммунного ответа на ранее
незнакомую инфекцию.
Созревание Т-лимфоцитов в тимусе: 1 этап
Структурнаячасть тимуса
Кора
Клетки,
обеспечивающие
созревание Тлимфоцитов
Функции
Селекция
Клетки-няньки –
Синтез «гормонов» + селекция –
эпителиальные клетки тимуса –тимулин, уничтожаются
тимуса.
тимозины,
клетки, не
тимопоэтины,
В корковом слое
способные
обеспечивают
тимуса находится
связывать
ранние
этапы
большая часть
собственные МНС
дифференциров
тимоцитов (85-95%)
-антигены, на
ки Т лимфоцитов выходе –либо
CD4+клетки
(распознают МНС II
класса) либо CD8+
(МНС I)
Созревание Т-лимфоцитов в тимусе: 2 этап
Клетки,Структур
обеспечивающие
ная часть
созревание Ттимуса
лимфоци
Функции
Селекция
тов
Мозговой Дендритные
слой
клетки,
макрофаги
Встречают CD4+ и
CD8+ клетки на
границе коркового и
мозгового слоя,
представляют им в
комплексе с МНС –
молекулами
аутоантигены
«-» селекция:
уничтожаются те
лимфоциты,
которые отвечают
на аутоантиген –
всего погибает
80-90% Т-клеток
ЦЕНТРАЛЬНЫЕ ОРГАНЫ ИММУНИТЕТА: положительная и отрицательная селекция (отбор) клеток
В центральных органахиммунитета происходят
процессы селекции клонов
лимфоцитов (Т-лимфоцитов
- в тимусе, В-лимфоцитов в костном мозге).
Биологический смысл
селекции, происходящей в
центральных органах
иммунитета – выход в
периферическую кровь
функционально зрелых и
неаутореактивных
лимфоцитов.
Селекция обеспечивается
поддержанием клонов,
распознающих пептиды
в составе «своих»
молекул главного
комплекса
гистосовместимости
(положительная
селекция), и
устранением
аутореактивных клонов
(отрицательная
селекция).
Интенсивность отбора тимоцитов
T клетки созревают втимусе,
но гораздо больше Тклеток погибает в
тимусе (не проходят ±
селекцию).
98% клеток погибает в
тимусе без развития
воспаления и
изменения размеров
тимуса.
1 – тельце Гассаля,
2 –тимоциты,
3 – апоптотические тимоциты.T клетки созревают в тимусе,
но гораздо больше Т- клеток погибает
содержит
1-2 x 108
клеток
2 x 106 в день
98% клеток погибает в тимусе без развития воспаления и
изменения размеров тимуса.
Макрофаги тимуса фагоцитируют апоптозные тимоциты.
Строение Т рецепторов
Т клеточный рецептор имеет и -цепи (естьальтернативные рецепторы, которые имеют
и цепи- обеспечивают иммунитет слизистых
оболочек, первичный ответ при инфекции).
Каждая и цепь в составе Т рецептора имеет:
- 1 наружный вариабельный Vдомен
- 1 наружный константный C – домен;
- трансмембранный сегмент;
- цитоплазматический хвостик (короткий).Т-клеточный рецептор
Место связывание
АГ
для сравнения:BCR - Ig Fab фрагмент
VL
CL
V V
VH V
L
VH
CH
CH
CH CH
CH CH
CL
Fab
Fc
Структура домена: гены Ig
карбогидраты
моновалентность
C C
+
+
Цитоплазмати
ческий хвост
+
Трансмембранная
область
Нет альтернативных константных
регионов
гетеродимеры, цепи связаны
дисульфидными мостиками
Очень короткий
цитоплазматический хвост
Место связывания антигена
образовано V и V областями
30,000 TcR одной специфичности
на клетку
Какие клетки выходят на периферию из тимуса?
В результате позитивной инегативной селекции в
кровоток поступают только
те Т-лимфоциты, которые:
имеют моноспецифичный
Т- клеточный рецептор
(TcR);
распознают молекулы MHC
I класса (CD 8+Тцитотоксические) или MHC
II класса (CD 4+ Т-хелперы)
не способны распознавать
аутоантигены (то есть не
аутореактивные Т
лимфоциты).
Строение Т рецепторного комплекса (TCR/ CD3)
На клеточнойповерхности -Т
клеточный рецептор
(или) расположен
в непосредственной
близости к
комплексу,
называемому CD 3 .
Через комплекс CD 3
происходит
передача сигнала с
Т клеточного
.
рецептора в клетку
Строение корецепторов (CD 4 или CD8)
Корецепторы (CD 4 илиCD8) расположены
на мембране Т
лимфоцита рядом с
комплексом
TCR/ CD3.
Корецепторы «узнают»
молекулы MHC
антигенпрезентиру
Поверхностная мембрана Т - лимфоцита
ющих клеток, а
рецептор
распознает
фрагменты
антигена.
Поверхностная мембрана АПККлетка-мишень
Антигенпрезентирующая клетка
Процесс созревания тимоцитов: этапы формирования корецепторов
Корецепторы:CD4 – распознает
молекулы МНС II
CD8 – распознает
молекулы МНС I
В коре находятся незрелые
тимоциты:
двойные негативные
(CD3/TcR CD4 - 8-)
двойные позитивные
(CD3/TcR CD4+ 8+)
При переходе в мозговой
слой клетки теряют либо
CD4, либо CD8 и
становятся
однопозитивными.
В мозговом слое - зрелые
однопозитивные
тимоциты, их -2 типа:
(CD3/TcR CD4+) –Т –
хелперы
(CD3/TcR CD8+) –Т –
цитотоксические
Такими они и выходят в
кровоток.Переход от двойных позитивных Т клеток к однопозитивным
CD4+ ТИМОЦИТ
ДВОЙНЫЕ ПОЗИТИВНЫЕ ТИМОЦИТЫ
TcR
TcR
√
X
CD8
3
MHC I класса
CD4
TcR
TcR
2
CD8
3
CD4
2
MHC II класса
MHC I класса
MHC II класса
Эпителий тимуса
Сигнал с CD4 отменяет экспрессию CD8 и наоборот
Реаранжировка генов T-клеточных рецепторов
При «созревании» рецепторовТ лимфоцитов в тимусе
гены α- β- или γ- и δ-цепей
претерпевают рекомбинацию
ДНК (реаранжировку генов,
кодирующих Т клеточные
рецепторы).
У α- β-Т –лимфоцитов сначала
перестраиваются гены βцепи, потом-гены α- цепи Т
клеточного рецептора.
Теоретически
реаранжировка
генов TCR
обеспечивает 10161018
вариантов Т
клеточных
рецепторов;
реально это
разнообразие
ограничено числом
TCR лимфоцитов в
организме до 109.
Реаранжировка генов, кодирующих -цепь Т рецептора
Реаранжировка генов, кодирующих -цепь Т рецептораИзначальная конфигурация генов, кодирующих цепь:
эти гены находятся в хромосоме в виде повторяющихся
сегментов, принадлежащих к трем классам: V (variable), D
(diversity) и J (joining), а также один или несколько
инвариантных константных регионов С (constant).
V
D
J
C
Изначальная конфигурация
Реаранжировка генов Тклеточного рецептора (TCR)
Рекомбинация ДНК происходитпри объединении V-, D- и Jсегментов, катализируется
комплексом рекомбиназ.
После перестройки VJ в генах αцепи и VDJ в генах β-цепи,а
также после присоединения
некодируемых N- и Pнуклеотидов, с ДНК
транскрибируется РНК.
Объединение с C-сегментом и
удаление лишних
(неиспользуемых) Jсегментов происходит при
сплайсинге первичного
транскрипта.
Соматическому гипермутагенезу
гены TCR не подвергаются..
Реаранжировка генов, кодирующих Т рецептор, путем соматической рекомбинации
1 этап – слияние генов D-J2 этап - слияние генов V-DJ
3 этап – сборка цепи
V
DJ
C
V
DJ
C
V-DJ слияние
D-J слияние
Реаранжировка генов, кодирующих -цепь Т рецептора, сборка Т рецептора
Реаранжировка генов, кодирующих -цепь Трецептора, сборка Т рецептора
При реаранжировке генов
-цепи Т клеточного
рецептора происходят
те же этапы, что и при
перестройке генов
-цепи.
По окончании
реаранжировки генов
цепи
происходит считывание
м РНК, построение белков,
совместная сборка и
- цепей, экспрессия на
поверхностную мембрану
Т- рецепторного
комплекса.
T клетки уже могут
распознать антиген и
взаимодействовать с
молекулами MHC I и II
классов через
корецепторы - CD4 и
CD8.
После этого начинаются
процессы
отрицательной
селекции (им
предоставляют
аутоантигены).Каким образом развивается аутотолерантность к
антигенам,
отсутствующим в тимусе?
T клетки, несущие TcR , и вступающие во
взаимодействие с антигенами тимуса,
уничтожаются (отрицательная селекция).
Но! Некоторые аутоантигены не
экспрессируются в тимусе – т.е. с ними тимоцит
встретится впервые, когда он выйдет на
периферию в качестве наивного Т лимфоцита.
Вывод: клеточная толерантность должна
развиваться и вне тимуса.
Костимуляция (иммунный ответ) ; отсутствие костимуляции (анергия, толерантность). иммунного ответа).
Процесс презентацииантигенов
сопровождается
или не
сопровождается
костимуляцией:
АПК эксперссируют
или не
экспрессируют
молекулы
костимуляции,
лигандами для
которых являются
молекулы на
поверхности
Тклетки.
Ко- стимулирующие молекулярные взаимодействия на АПК и Тлимфоците: CD40-CD 40L и комплекс B7-CD 28
Гипотезы повреждения и костимуляцииПолная экспрессия функций Т лимфоцитов зависит от того, когда
и где экспрессируются костимуляторные молекулы
Клетки, контактиру
ющие только
с аутоАГ
Смерть клетки путем
апоптоза.
Физиологическая
гибель.
Нет тревоги, угрозы
АПК
Нет тревоги, угрозы
Нет активации АПК, нет иммунного ответа
АПКГипотеза угрозы
Клеточная смерть
путем некроза
напр.повреждение
ткани, вирусная
инфекция
АПК
ТРЕВОГА
Патогены,
распознанные
рецепторами
АПК
АПК, определившие сигналы угрозы, экспрессируют
костимулирующие молекулы,
активируют Т – клетки и иммунный ответ
Выжившие в результате
положительной и
отрицательной
селекции Т-клетки
выходят из тимуса
в кровоток - это
наивные Тлимфоциты, еще
не встречавшиеся
с антигеном.
Наивная Т-клетка циркулирует
по крови и периодически
заходит в лимфоузлы, где в Тклеточной зоне контактирует с
антигенпрезентирующими
клетками.
АПК, представляя антигены,
«отбирают» Т лимфоциты, чей
рецептор наиболее подходит к
антигену, и дают таким
клеткам сигналы для
преимущественного
выживания, активации,
пролиферации и
дифференцировки –для
обеспечения адекватного
иммунного ответа на АГ
Зрелые Т-лимфоциты: жизненный путь на периферии
После встречи с антигеном в лимфоузлеТ-клетка с помощью цитокинов,
костимуляционных молекул АПК
приобретает способность
клонироваться (у всех ее потомков –
одинаковые моноспецифичные Трецепторы, распознающие АГ).
Среди потомков делящегося Т
лимфоцита появляются:
клетки центральной памяти (TCM - stem
cell memory T cells),
короткоживущие эффекторные клетки,
осуществляющие иммунную реакцию
(SLEC или TEMRA-клетки),
эффекторные клеткипредшественники памяти TEM,
Все эти клетки выходят
из лимфоузла,
перемещаются
по крови.
Эффекторные клетки затем
могут выйти
из кровотока для
осуществления
иммунного ответа
в периферической ткани
органа, где находится
патоген (пример –
вирусная инфекция).
К моменту окончания
иммунного ответа
большинство
эффекторных клеток
погибает, 5-10%
остаются в виде клеток
памяти.
.
Эмиграция эффекторной Т-клетки в ткань при вирусной инфекции
Эмиграция эффекторной Т-клетки в ткань при вируснойинфекции
Зрелые Т-лимфоциты: рециркулирующие и резидентные
Лимфоциты рециркулируютпо лимфе и кровотоку
в поисках антигена,
который нужно
распознать и запустить
иммунный ответ.
Часть Т-лимфоцитов
находится не в крови
и не в лимфоузлах,
а в органах,
не относящихся
к иммунной системе –
резидентные Т
лимфоциты тканей,
которые являются
потомками эффекторных
Т клеток, потерявших
способность
рециркулирвать.
Некоторые периферические для
иммунной системы ткани,
(слизистая тонкой кишки,
брюшная полость и др.)
позволяют эффекторным Тлимфоцитам проникать внутрь
свободно;
Другие ткани (ЦНС, слизистые
половых органов, легкие,
эпидермис, глаза) практически не
пропускают Т лимфоциты(не
экспрессируют молекулы хоминга
–аддресины или экспрессируют в
очень небольших количествах);
большой поток эффекторных Тклеток в эти ткани наблюдается
только при реакции воспаления.ОТКРЫТИЕ В - КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА
1954 - Bruce Glick, США
Изучение функции Фабрициевой сумки (bursa Fabricius), лимфоидного
органа в области клоаки у курицы
Бурсэктомия у кур не приводила
к видимым эффектам
Бурсэктомированных цыплят
использовали в
экспериментах по получению
антител к антигенам
Salmonella
Ни у одного из
бурсэктомирован
ных цыплят не было
обнаружено антител
против Salmonella
Было установлено, что бурса – это орган, в котором развиваются
антителообразующие клетки – поэтому их назвали B клетками
у млекопитающих bursa Fabricius отсутствуетПроисхождение В клеток и орган, в котором
созревают В-клетки
В крови есть
зрелые В-клетки
Перенос меченых клеток
фетальной печени
Нормальный костный мозг
Зрелые
В-клетки
отсутствуют
Дефектный костный мозг
B клетки начинают развиваться в фетальной печени
После рождения их развитие продолжается в костном мозгеКостный мозг
S
M
M
E
Стадии развития В лимфоцита
1). Стволовая клетка2) Общий лимфоидный
предшественник для Bи T-клеточного пути
развития - наиболее
ранняя лимфоидная
клетка, для которой еще
не определилось одно из
двух направлений
развития;
3а) Ранняя про-В-клеткаближайший потомок
предыдущего клеточного
типа и предшественник
последующих,
продвинутых в
дифференцировке
клеточных типов
(приставка "про" от англ.
progenitor);
3б) Поздняя про-В-клетка
4) пре-В-клетка - клеточный тип,
окончательно вышедший на В-клеточный
путь развития (приставка "пре" от англ.
precursor);
5) незрелая В-клетка - завершающая
костномозговое развитие клеточная
форма, которая активно экспрессирует В
рецептор - поверхносный иммуноглобулин
и находится в стадии отбора на
способность взаимодействовать с
собственными антигенами;
6) зрелая В-клетка -клеточный тип
периферии, способный
взаимодействовать только с чужеродными
антигенами;
7) Плазматическая клетка (плазмоцит)
эффекторная, антителопродуцирующая
клеточная форма, которая образуется из
зрелой В-клетки после ее контакта с
антигеном и синтезирует антитела
(иммуноглобулины)Стадии развития В клеток
Ранняя про - В
Поздняя про - В
Стволовая клетка
Большая пре
-В
периферическая
Малая пре -В
Незрелая В
зрелая В клетка
На каждой стадии развития происходит реаранжировка генов
тяжелых и легких цепей Ig, экспрессия поверхностных Ig, экспрессия
адгезионных молекул и рецепторов к цитокинам
Стадии развития В клеток
Ранние этапы развитияВ-лимфоцитов
зависят от прямого
контактного
взаимодействия со
стромой.
В результате этих
контактов
происходит
пролиферациия Влимфоцитов и
переход их на
следующую стадию
развития – поздних
про-В-клеток.
На более поздних этапах
развития В-лимфоцитов
требуются гуморальные
факторов стромы костного
мозга – цитокины(ИЛ-7)
На поверхности поздних про-Вклеток экспрессируется
рецептор к ИЛ-7.
Под влиянием ИЛ-7 про-Влимфоциты пролиферируют и
дифференцируются в ранние
пре-В-клетки,
характеризующиеся наличием в
их цитоплазме тяжелой μ (мю)полипептидной цепи
иммуноглобулина М.
Стадии развития В клеток
В дальнейшем ранние пре-Вклетки, трансформируются вмалые пре-В-лимфоциты,
у некоторых из которых в
цитоплазме помимо μ
-тяжелой полипептидной
цепи выявляются молекулы
иммуноглобулина
появляются
легкие цепи
иммуноглобулина(или
каппа, или лямбда), далее
происходит экспрессия на
поверхностную мембрану
мономерных
иммуноглобулинов М.
. Иммуноглобулины М и
являются антигенраспознающими
рецепторами В-клеток.
Антигенная специфичность
рецепторов генетически
детерминирована.
Далее происходит экспрессия на
клетках иммуноглобулинов
класса D (IgD) .
С экспрессией на лимфоцитах
иммуноглобулинов D
завершается этап антигеннезависимого созревания Вклеток.
Развитие В клеток в костном мозге
Более 75% созревающих в костноммозге В-клеток не попадает в
кровоток, а погибает путем
апоптоза и поглощается
костномозговыми макрофагами.
+ селекция происходит при
взаимодействии В - клеток и клеток
стромы – остаются В-клетки с
иммуноглобулинов (Ig).
- селекция происходит при
взаимодействии В-клеток и
антигенпредставляющих
клеток(АПК), презентирующих
фрагменты аутоантигенов
Выжившие клетки
продолжают созревать
и достигают
центрального
венозного синуса.
На всех этапах
созревания В-клеток
важную роль играет
связь В-клеток с
клетками стромы
(микроокружение) и
присутствие цитокинов
– в частности,
интерлейкина -7.Развитие В клеток в костном мозге: «созревание»
моноспецифичных рецепторов, «+» и «-» селекция
B
B
B
B
Регуляция созревания В рецепторов
Каждая В – клетка - моноспецифична
Уничтожение аутореактивных В - клеток
Выход полноценных, но еще незрелых
В клеток на периферию (сначала в
селезенку, затем - в лимфатические
узлы)
Костный мозг обеспечивает
МИКРООКРУЖЕНИЕ ДЛЯ СОЗРЕВАНИЯ,
ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ И РАЗВИТИЯ В КЛЕТОКСозревающие В клетки
Клетки стромыB
B
Клетка стромыСхема развития В – клеток в костном мозге
предшественники
Э
н
д
о
с
X
X
X
Т
К
О
С
Т
Н
О
Й
П
Л
А
С
Т
И
Н
К
Незрелые и зрелые
В клетки
Пре -B
клетки стромы
макрофаг
Центральный синусВ - клеточная аутотолерантность – выход зрелых
В клеток из костного мозга
B
IgD
IgM
Малый пре –В не несет
рецепторы
Незрелый В-лимфоцит
не распознает ауто Аг
YY
B
YY
Незрелый
В
YY
B
YY
YY
Малый
пре-В
IgD и IgM рецепторы
IgD
IgM
IgM
IgD
IgM
IgD
Зрелый В-лимфоцит
выходит
на периферию
Постулаты теории клональной селекции
Каждый В лимфоцит имеетрецептор уникальной
специфичности.
Высокоаффинное (прочное)
взаимодействие рецептора
с антигеном приводит к
активации
В - лимфоцита.
Специфичность
рецептора сохраняется в
процессе пролиферации
и дифференцировки
лимфоцита.
Лимфоциты с
рецепторами,
специфичными к
собственным
антигенам(потенциально
аутоагрессивные),
удаляются на ранней
стадии
дифференцировки.
Гены молекул иммуноглобулинов (Ig)
Каждая молекула Ig состоитиз 2 тяжелых (Н) и двух
легких (L) цепей, в
каждой из этих цепей
присутствуют
константные (С) и
вариабельные (V)
области.
Вариабельные (V) и
константные (С) области
иммуноглобулиновых
молекул кодируются
отдельными генами.
Для вариабельных областей
существует множество
генов (V1-Vn), а для
константой части
молекулы Ig – один С-ген.
Легкие цепи
иммуноглобулинов
кодируются генными
сегментами V и J.
Тяжелые цепи кодируются
сегментами V и J, а также
дополнительным
сегментом (D).Стадии дифференцировки
определяются реаранжировкой генов Ig
Стадии
созревания
конфигурация
генов
IgH
Стволовая
клетка
Ранний
про-В
От
DH до
JH
Поздний
про-В
От VH до DHJH
Большой
пре-В
VHDHJH
Пре-В клетка
экспрес
сирует
рецептор
Гены легких цепей Ig пока не реаранжируются
Реаранжировка генов, кодирующих легкие цепи молекулы Ig
После завершения перестройки(реаранжировки) генов, кодирующих
тяжелые цепи молекулы Ig, начинается
перестройка генов легких цепей.
Всего существует 2 типа легких цепей –либо
каппа, либо лямбда.
После этого на поверхности незрелого В
лимфоцита появляется В - клеточный
рецептор, состоящий из двух тяжелых
цепей(H) и двух легких (L).
Положительная и отрицательная селекция В лимфоцитов в костном мозге
+ селекция происходит при взаимодействии В клеток и клеток стромы – остаются В-клетки спродуктивной перестройкой генов
иммуноглобулинов (Ig), остальные –
уничтожаются апоптозом.
- селекция – уничтожение аутореактивных Влимфоцитов может происходить и в костном
мозге, и в селезенке – в органе, в который
мигрирует большинство новообразованных В
–клеток в период внутриутробного развития.
Гены Ig молекул
До встречи с антигеном:Рекомбинации
ограниченного числа
генных сегментов
V, D и J
создают бесконечное
число
моноспецифичных
В рецепторов (их намного
больше, чем антигенов)
После встречи с антигеном:
После антигенной стимуляции –
во время иммунного ответа
на антиген
в генах легких и тяжелых
цепей молекул
иммуноглобулинов в
пролиферирующих В
лимфоцитов происходят
точечные соматические
мутации
(более тонкая «подгонка» АТ
к АГ).
Дальнейшие этапы развития В-лимфоцитов
Из костного мозга уже отобранные В-лимфоцитыпопадают с током крови в первичные фолликулы
селезенки.
В селезенке происходит ряд этапов функционального
«дозревания» В лимфоцитов, включая экспрессию
МНС II класса на их поверхностной мембране.
Далее В лимфоциты мигрируют в лимфатические узлы
– для встречи с комплементарным их рецептору
антигеном.
До встречи с антигеном В лимфоцит называется
«наивным».
Выход зрелых В клеток на периферию
Из костного мозга выходят только те В –лимфоциты,у которых успешно произошла реаранжировка
генов тяжелых и легких цепей Ig молекул, причем
эти В –лимфоциты не активируются в ответ на
аутоантигены –то есть не являются
аутореактивными.
Все остальные в клетки погибают в костном мозге
путем апоптоза.
На поверхности отобранных В лимфоцитов
экспрессируются IgM и IgD –Ig рецепторы,
которые синтезируются с одной ДНК путем
альтернативного сплайсинга.Рециркулирующие В – клетки встречаются со «своим»
антигеном в лимфоузле
В клетки покидают сосуды
и входят в ЛУ через ВЭВ
В клетки быстро
пролиферируют
Аг попадает в ЛУ через
афферентный
YY
Y
Y
YYY
YY
Y
YYY
Y
Y
Зародышевый центр
Интенсивная пролиферация
Из зародышевого центра
выходят В клетки,
которые дифференци
ровались в плазматичес
кие клетки
YY
YYY
Y
B
YY
B
YY
YY
Зрелый периферический Распознал
В -лимфоцит
неауто-АГ
на периферии
B
Y
Y
Y
YY
YY
YY
YY
Y
YY
Дифференцировка В – клеток на периферии
Ig - секретирующая
плазматическая клетка
Схема ответа В-лимфоцитов на антиген
Субпопуляции В лимфоцитов: В1 и В2
В 2 (CD 5-) лимфоциты связывают белковые антигены,им нужна помощь Т-хелперов, они синтезируют
иммуноглобулины разных классов в процессе
адаптивного гуморального иммунного ответа.
В 1 (CD 5+) популяция лимфоцитов реагируют на
полисахариды капсулы бактерий или компоненты их
стенки(такие антигены называются Т –
независимыми), при ответе на Т- независимые
антигены В –лимфоцитам не нужна помощь Тхелперов.
Поскольку большинство антигенов – белковой природы,
популяция В 2 лимфоцитов намного более
многочисленная по сравнению с В1.
Субпопуляция В1 лимфоцитов
После активации В1клетки секретируют
анти-полисахаридные
антитела класса М
(IgM), которые
присоединяются к
поверхности
бактериальной клетки.
Распознают эпитопы АГ с
повторяющимися
структурами фосфотидилхолин,
липополисахариды и
др.
Далее происходит активация
системы комплемента и
быстрый комплемент –
зависимый лизис
бактериальной клетки.
Нет иммунологической памяти; нет
более высокой эффективности
ответа при повторном введении
антигена.
В 1 клетки производят
иммуноглобулины только
класса М. Для этого им не
требуется помощь Т лимфоцитов - хелперов.Взаимодействие АПК, Т- и В- лимфоцитов в ходе иммунного ответа на АГ
Вопросы к занятию № 3а
1.2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Какова роль тимуса в процессе дифференцировки Тлимфоцитов?
Каков биологический смысл положительной и отрицательной
селекции?
Каковы механизмы формирования разнообразия Т- клеточных
рецепторов?
Опишите строение Т- клеточного рецептора.
Перечислите основные субпопуляции Т лимфоцитов.
Опишите строение В - клеточного рецептора.
Назовите субпопуляции В-лимфоцитов.
Опишите этапы антигеннезависимой дифференцировки Влимфоцитов.
Опишите процесс антигензависимой дифференцировки Влимфоцитов.
Какие клетки являются конечной стадией развития Влимфоцитов?
11. Антигеннезависимая дифференцировка Т лимфоцитов
происходит в:
щитовидной железе
тимусе
лимфатических узлах
селезенке
гипоталамусе
2. Специфичность Т-клеточного рецептора закладывается на
стадии:
двойной негативной клетки
двойной позитивной клетки
одинарной позитивной клетки
после выхода Т-лимфоцита из тимуса
при взаимодействии с макрофагом
Тестовые задания к занятию №3
3. Общим маркером Т-лимфоцитов является молекула:CD 3
CD 4
CD 8
CD 16
CD 34
4. Для Т-лимфоцитов-хелперов характерны маркеры:
CD 3 ; CD 4
CD 3; CD 8
CD 4; CD 8
CD 16; CD 56
CD 4; CD 117
Тестовые задания к занятию №3
5. Для цитотоксических Т-лимфоцитов характерны маркеры:CD 3 ; CD 4
CD 3; CD 8
CD 4; CD 8
CD 16; CD 56
CD 4; CD 117
6. Антигеннезависимая дифференцировка В лимфоцитов
происходит в:
щитовидной железе
тимусе
лимфатических узлах
селезенке
красном костном мозге
7. Зародышевые гены тяжелых цепей иммуноглобулинов включают
регионы:
B
DP
V
D
J
8. Основными маркерами В-лимфоцитов являются:
CD 3
CD 21
CD 19
CD 34
CD 4
Тестовые задания к занятию № 3
9. На поверхности зрелых В-лимфоцитов присутствуют в качестве Врецепторов:Ig E
IgM
IgG
IgD
IgA
10. Конечной стадией антигензависимой дифференцировки Влимфоцитов являются:
Естественные киллеры
Макрофаги
Т-лимфоциты
Плазматические клетки
В1-лимфоциты
Предшественники, прекоммитированные к развитию в
, непрерывно мигрируют от костного мозга в вилочковую железу, однако их число, по-видимому, очень мало. Незрелые предшественники Т-клеток поступают в область коры вилочковой железы, где созревают в функциональные субпопуляции Т-клеток. Особенностью развития тимоцитов является высокая скорость пролиферации.
У человека возможно и экстратимическое созревание Т-клеток
, однако для оптимального развития Т-лимфоцитов необходимо наличие неповрежденной вилочковой железы.
Различные стадии развития тимоцита можно определить по изменению экспрессии поверхностных и цитоплазматических молекул, рецепторов цитокинов и состояния реаранжировки генов Т-клеточного рецептора. Т-клеточный рецептор (TCR) распознает только короткие пептиды, которые заполняют полость в молекулах первого или второго класса главного комплекса гистосовместимости (МНС I и II, МНС комплекс у человека обозначается как HLA). Презентация таких пептидов Т-лимфоцитам обеспечивается антигенпредставляющими клетками.
TCR - гетеродимерный комплекс, сформированный при ассоциации а-и бета- или у- и S-субъединиц. Каждая из этих субъединиц кодируется отдельным геном. Т-клетки с рецепторами типов ар и уq являются различными линиями, которые разделяются до начала реаранжировки гена TCR.
Наименее зрелые клетки-предшественники в вилочковой железе экспрессируют антиген CD7. Некоторые из них экспрессируют также CD44. CD44, рецептор для гиалуроновой кислоты, - один из факторов, определяющих перемещение предшественников Т-клеток в вилочковую железу. Из этих предшественников далее образуются CD2+/CD7+ клетки, в цитоплазме которых присутствует CD3. Белковый комплекс CD3 обеспечивает передачу сигналов через TCR.
Пептидные цепи CD3-комплекса начинают синтезироваться на стадии про-Т-лимфоцита, и их экспрессия предшествует появлению на мембране TCR.
Т-лимфоциты уq-линии первыми начинают экспрессировать рецептор CD3, но на них нет молекул CD4 или CD8. Несколько позднее на поверхности клеток, экспрессирующих рецептор типа аb, начинают одновременно экспрессироваться антигены CD4 и CD8. К этому времени заканчивается реаранжировка генов а- и р-цепей, и на поверхности клеток экспрессируется рецепторный комплекс TCR ab/CD3.
По мере того как клетки , экспрессирующие CD4+, CD8+ и TCR (так называемые дважды положительные клетки), проходят от коры к мозговому веществу вилочковой железы, они созревают в CD4+ хелперные или CD8+ цитотоксические Т-клетки. Клетки, которые созревают до стадии CD4+ или CD8+, составляют менее 5% тимоцитов. Эти лимфоциты покидают вилочковую железу и заполняют вторичные лимфоидные ткани (лимфатические узлы, селезенку, лимфоидную ткань, ассоциированную со слизистыми оболочками).
Т-лимфоциты с рецептором уq и CD5+B1-клетки являются функционально аналогичными популяциями, которые развиваются параллельно. Т-клетки с рецептором типа уq найдены в различных тканях, включая селезенку, эпидермис и эпителий слизистой оболочки матки, влагалища и языка. Предполагается, что эта популяция клеток может исполнять роль иммунного надзора в перечисленных тканях.
Формирование комплекса Т-клеточного рецептора и положительная и отрицательная селекция в вилочковой железе
Как и гены иммуноглобулинов, гены Т-клеточного рецептора собираются из различных сегментов, находящихся первоначально в зародышевой конфигурации. Гены Т-клеточного рецептора подвергаются процессу соматической реаранжировки, при которой кодирующие сегменты присоединяются друг к другу, а присутствующие между ними интронные последовательности удаляются. Вариабельность соединений и вставок обеспечивает возникновение различий TCR и приводит к огромному количеству различных последовательностей гипервариабельного участка TCR. Репертуар различных TCR считается даже большим, чем репертуар молекул Ig (по оценкам, репертуар ab-TCR составляет 1015, а для yq-TCR - 1018). В отличие от В-лимфоцитов, Т-лимфоциты не секретируют свои рецепторы.
Дважды позитивный тимоцит проходит через многоступенчатый процесс, известный как тимическая селекция. На первой фазе, называемой положительной селекцией, TCR дважды позитивного тимоцита взаимодействуют с молекулами МНС, которые экспрессируются эпителиальными клетками в коре вилочковой железы. Тимоциты, способные распознавать комплекс антигена с молекулой HLA, ускользают от апоптоза и вступают в дальнейшую дифференцировку, в то время как тимоциты, не способные к такому взаимодействию, погибают.
Поскольку рекомбинации , затрагивающие возникновение TCR, являются случайными, в вилочковой железе могут развиваться и пройти позитивную селекцию Т-клетки, экспрессирующие TCR, специфичные к чужеродным и собственным антигенам. Существует вероятность, что Т-клетки, реактивные к собственным структурам организма, будут взаимодействовать с аутоантигенами в тканях, что может привести к нежелательным аутоиммунным реакциям. Для предотвращения этого дважды положительные клетки подвергаются второй фазе отбора, которая называется негативной селекцией. В ходе этой фазы дважды положительные клетки взаимодействуют с комплексом МНС-пептид, экспрессированным на поверхности дендритной клетки.
Т-клетки , TCR которых взаимодействует с комплексом МНС-пептид с высокой аффинностью, подвергаются апоптозу. В ходе негативной селекции удаляются Т-клетки, экспрессирующие TCR, обладающие реактивностью к собственным антигенам.
Дважды положительные клетки , пережившие негативную селекцию, снижают экспрессию корецепторов CD4 или CD8, что приводит к развитию или CD4+CD8" или CD4"CD8+ (моноположительных) Т-лимфоцитов. При этом Т-лимфоциты, распознающие антигены, представляемые молекулами МНС II класса, сохраняют экспрессию корецептора CD4+, a Т-лимфоциты, распознающие антигены, представляемые молекулами МНС I класса, сохраняют экспрессию корецептора CD8+. Эти клетки покидают вилочковую железу и образуют периферические зрелые CD4+ и CD8+ Т-клетки.
Экспрессия некоторых поверхностных молекул при развитии Т-клеток
Клетки и цитокины, регулирующие развитие Т-клеток
Вилочковая железа состоит из корковой и медуллярной областей, различающихся по количеству тимоцитов и составу стромальных клеток. Стромальные клетки вилочковой железы влияют на развитие тимоцитов как посредством прямых межклеточных взаимодействий, так и секрецией растворимых медиаторов.
Тимоциты и клетки тимического эпителия экспрессируют ряд поверхностных клеточных детерминант, некоторые из которых вовлечены в адгезию этих клеточных популяций друг к другу. Рецептор CD2 на тимоцитах определяет связывание с детерминантой CD58 (LFA-3) и межклеточной адгезионной молекулой-1 (ICAM-1), представленными на клетках тимического эпителия. Взаимодействия между развивающимися лимфоцитами и стромой могут активировать обе популяции. Например, связывание тимоцитов со стромой может стимулировать продукцию ИЛ-1 стромальными клетками и повышать экспрессию рецептора ИЛ-2 на тимоцитах.
ИЛ-7 стимулирует полиферацию тимоцитов, и фактор стволовых клеток увеличивает этот эффект. Эпителиальные клетки вилочковой железы у человека являются источником цитокинов ИЛ- 1а и b, ИЛ-3, ИЛ-6, ИЛ-8, колониестимулирующих факторов (Г-КСФ и ГМ-КСФ), лейкозингибирующего фактора (LIF) и TGF-p, а также гормонов тимозина или тимопоэтина, оказывающих влияние на пролиферацию и дифференцировку тимоцитов.
Цитокины , необходимые для развития Т-клеток, могут продуцироваться самими Т-клетками. Тимоциты производят IFN-y, ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-3 и ИЛ-4.
Описанный выше этап дифференцировки клеток характеризуется тем, что в организме появляется большое количество Т- и В-лимфоцитов, которые с помощью своих антигенраспознающих рецепторов (ТАГРР и ВАГРР) обладают способностью распознавать как собственные (self, ауто), так и чужие (non-self, алло) антигены. Это потенциально опасно, поскольку ауто-реактивные Т- и В-лимфоциты при определенных обстоятельствах могут стать причиной срыва толерантности и развития аутоиммунных заболеваний. Поэтому очередной этап развития иммунной системы со¬стоит в том, чтобы среди большого пула Т- и В-лимфоцитов отобрать (селекционировать) такие, которые бы не реагировали с собственными антигенами, но при этом сохраняли способность различать чужеродные антигены. Итак, третий этап антигеннезависимой дифференцировки лимфоидных клеток – развитие (индукция) толерантности (ареактивности, терпимости) по отношению к аутоантигенам.
Первичная функция ТАГРР на тимоцитах и ВАГРР на предшественниках В-лимфоцитов заключается в том, что с их помощью передается сигнал, который приводит к отбору (селекции) лимфоидных клеток, реагирующих на ауто-АГ.
Вторичная функция ТАГРР и ВАГРР – участие в иммунном ответе на этапе распознавания чужеродных антигенов.
Различают три пути отбора (селекции) лимфоидных клеток.
1. Разрушение (делеция) аутореактивных Т- и В-лимфоцитов, обладающих высокой авидно-стью (сродством) к ауто-АГ, – негативная селекция; происходит в центральных органах им¬мунитета.
2. Индукция (установление) анергии аутореактивных лимфоидных клеток. Этот путь селекции реализуется на периферии, лимфоциты при этом не погибают вследствие их невысокой авидности по отношению к ауто-АГ. Такая форма негативной селекции резервирует Т- и В-клетки в состоянии иммунологической толерантности (неотвечаемости), но при этом очень часто они сохраняют на своей поверхности аутореагирующие рецепторы.
Поскольку эмбриональный период является периодом формирования толерантности иммунной системы, то можно достичь толерантности к чужеродным антигенам, если в этот период искусственно ввести их в организм.
3.Позитивная селекция; состоит в том, что в тимусе и костном мозге контакт незрелых лимфоцитов и пре-В-лимфоцитов с ауто-АГ индуцирует созревание Т- и В-лимфоцитов, но поскольку сигнал клеток получается недостаточным из-за низкой авидности, то пролиферация клеток не наступает, а значит не происходит и развитие иммунного ответа.
Рассматривается также еще один – четвертый механизм толерантности за счет формирования на периферии активной супрессии в результате функции Т-регуляторных клеток либо дис-баланса Т-хелперов 1-го и 2-го типов, о чем речь будет идти ниже.
Как уже упоминалось, сохранившиеся в организме аутореактивные Т- и В-лимфоциты при определенных обстоятельствах могут стать причиной срыва толерантности и развития аутоиммунного заболевания.
На этапе индукции толерантности в вилочковой железе из тимоцитов, которые несут два дифференцировочных антигена CD4 и CD8 и являются так называемыми CD4+CD8+ клетками, образуются субпопуляции Т-лимфоцитов: Т-хелперы (CD4+CD8- клетки) и Т-киллеры/супрессоры (CD4-CD8+ клетки).
На этом заканчивается период антигеннезависимой дифференцировки Т- и В-лимфоцитов, они покидают вилочковую железу и костный мозг и расселяются в Т- и В-зонах (соответственно) периферических органов иммунной системы. Расселяющиеся лимфоциты называются зрелыми покоящимися клетками, готовыми к иммунному ответу. Все они находятся в G(0) фазе клеточ-ного цикла.
Следует помнить, что Т- и В-клетки на своей поверхности экспрессируют антигенраспознающие рецепторы, которые способны распознать только один антиген (точнее, одну детерминанту (эпитоп)).
Таким образом, специальными органами, где происходит дифференцировка гемопоэтиче-ских стволовых клеток, служат: для Т-лимфоцитов – тимус, для В-лимфоцитов – в эмбриональном периоде – печень, во взрослом организме – костный мозг.
Различают следующие основные этапы развития и дифференцировки Т- и В-лимфоцитов.
Первый этап – продуцирование большого числа Т- и В-лимфоцитов, обладающих специфичностью к различным антигенам (в том числе и к антигенам собственного организма). Этот этап имеет две важные стадии:
1. Стадию раннего предшественника, когда на поверхности будущего В-лимфоцита появляется суррогатная L-цепь иммуноглобулина. а на поверхности будущего Т-лимфоцита- ГП-33 (один из элементов ТАГРР);
2. Стадию незрелого предшественника, когда на В-лимфоцитах появляется молекула иммуноглобулина или ВГРАР, а на поверхности Т-лимфоцита – ТАГРР с альфа-, бета- или гамма-, дельта-цепями.
Второй этап – элиминация из громадного количества зрелых предшественников тех клеток, которые являются реактивными по отношению к собственным антигенам. В результате такого “обучения” иммунной системы развивается состояние толерантности.
Третий этап – дозревание оставшихся лимфоидных клеток и превращение их в зрелые покоящиеся Т- и В-лимфоциты, способные реагировать на чужеродные антигены.
Суть клонально-селекционной теории Ф.Бернета заключается в том, что в процессе созревания лимфоцитов происходит строгая выбраковка клеток по следующим признакам:
Неспособность к распознаванию рецепторов МНС 1 и МНС 2 клеток собственного организма;
Способность к распознаванию собственных антигенов, презентируемых на МНС 1 и МНС 2.
Клетки, имеющие вышеперечисленные признаки, подлежат уничтожению. Остальные лимфоциты продолжают дифференцировку и становятся родоночальниками клонов – групп лимфоцитов, имеющих антигенраспознающий рецептор одинаковой специфичности.
Селекция т-лимфоцитов
Незрелые T-лимфоциты мигрируют из костного мозга в кору тимуса и начинают интенсивно делиться. В коре тимуса в процессе контакта с эпителиальными клетками тимуса, которые экспрессируют и MHC I и MHC II молекулы осуществляется позитивная селекция. Лимфоциты, способные взаимодействовать с молекулами МНС, получают позитивный стимул - сигнал к размножению, а клетки неспособные взаимодействовать с МНС получают негативный сигнал к самоликвидации (апоптозу).
Далее прошедшие позитивную селекцию лимфоциты мигрируют в мозговое вещество тимуса и на границе коры и мозгового вещества происходит негативная селекция Т-лимфоцитов. Негативная селекция осуществляется в процессе их взаимодействия с дендритными клетками и макрофагами, которые презентируют собственные антигены организма.
Аутоагрессивные Т-лимфоциты получают сигнал к самоликвидации (негативная селекция), аутотолерантные – продолжают размножаться и покидают мозговое вещество тимуса, расселяются по периферическим органам иммунной системы. Было показано, что в процессе селекции не проходит отбор и погибает около 95% Т-лимфоцитов.
Лимфоциты, располагающиеся в корковом слое тимуса вначале имеют на мембране как CD4, так и CD8 – рецепторы. Далее клетки, распознающие MHC I теряют CD4 и становятся CD8+ , т.е. превращаются в ЦТЛ, а клетки, распознающие MHC II – наоборот, теряют CD8 и превращаются в CD4+, т.е. в Т-хелперы.
Т-лимфоциты, прошедшие дифференцировку и отбор в тимусе называются «наивные» Т-лимфоциты. После встречи с соответствующим антигеном они превращаются в примированные или эффекторные Т-лимфоцитами, готовые воспринимать цитокиновые сигналы к активации.
Селекция в-лимфоцитов
В костном мозге незрелые B-лимфоциты, проходят негативную селекцию. Лимфоциты, способные связывать собственные антигены своим поверхностным антигенраспознающим рецептором IgM, получают сигнал к самоликвидации (апоптозу) и погибают. Прошедшие негативный отбор В-лимфоциты делятся, причем, каждый из них образует группу потомков, клон, обладающих одинаковой специфичностью. Зрелые В-лимфоциты выходят из костного мозга в кровоток и заселяют лимфоидные органы.
Лекция 6. Нарушения иммунитета
К нарушениям иммунитета относятся:
Реакции гиперчувствительности;
Аутоиммунные реакции;
Иммунодефицитные состояния.
Реакции гиперчувствительности. Классификация Джелла и Кумбса – 4 типа реакций гиперчувствительности.
РГЧ 1-го типа.
Астма, сенная лихорадка, экзема, крапивница, пищевая аллергия.
Аллергены: лекарственные вещества, гетерологичная сыворотка, пыльца растений, фекалии микроклещей пыли, пищевые продукты (яйца, молоко, крабы, рыба и др).
Факторы, способствующие проникновению аллергенов в слизистую оболочку являются частицы дизельных выхлопов (ЧДВ), содержащиеся в городской атмосфере.
Наследственная предрасположенность к аллергическим реакциям 1-го типа связана с аллелями HLA-B8 иDR3.
Диагностика: постановка кожных проб.
Лечение: гипосенсибилизация – подкожное введение возрастающих доз аллергена, в результате происходит переключение на преимущественный синтез IgG.
Профилактика: исключение контакта с аллергеном; при необходимости введения гетерологичной лечебной сыворотки – дробное введение по Безредке. Назначение антигистаминных препаратов.
РГЧ 2-го типа – цитотоксические реакции с участием IgGи комплемента. Наблюдаются в случае, если антитела реагируют с антигеном, находящимся на клеточной мембране. При этом к образовавшемуся комплексу присоединяется комплемент, последние фракции которого (С5-С9) называются перфоринами. Белковые молекулы этих фракций встраиваются в клеточную мембрану, образуя крупную пору, через которую в клетку поступает вода. В результате происходит лизис клетки. Этот тип гиперчувствительности может развиться при длительном применении лекарственных преператов, способных адсорбироваться на эритроцитах; пример-антиаритмический препарат квинидин. Примером РГЧ 2-го типа является гемолитическая болезнь новорожденных при резус-конфликте (ретикулоцитоз). Другой пример- тромбоцитопеническая пурпура.
РГЧ 3-го типа связаны с образованием большого количества иммунных комплексов при поступлении в организм большого количества чужеродного белка без предварительной сенсибилизации, например при введении лечебных или профилактических гетерологичных антисывороток. В результате временного дефицита комплемента происходит отложение малых иммунных комплексов в стенках сосудов, суставах, почечных клубочках. После восполнения дефицита комплемента он фиксируется на малых иммунных комплексах (МИК), находящихся в тканях. К образовавшимся большим иммунным комплексам (БИК) мигрируют макрофаги, которые поглощают БИК и выделяют цитокины, вызывающие воспалительную реакцию. Результатом РГЧ 3-го типа является развитие сывороточной болезнм, проявлениями которой являются васкулит, артрит и гломерулонефрит.
РГЧ 3-го типа может проявляться в форме так называемого феномена Артюса. В отличие от сывороточной болезни, феномен Артюса – это бурная местная воспалительная реакция, которая сопровождается некрозом тканей в месте введения антигена. Обязательным условием для развития реакции Артюса является предварительная сенсибилизация организма данным антигеном (чужеродным белком) и наличие в сыворотке крови высокой концентрации антител к этому антигену.
РГЧ 4-го типа происходят с участием цитотоксических лимфоцитов.
Существуют 3 вида РГЧ 3-го типа: контактная, туберкулиновая и гранулематозная.
Контактная гиперчувствительность характеризуется экзематозной реакцией в месте воздействия антигена. Сенсибилизация организма происходит, как правило соединениями никеля, хрома, веществами, входящими в состав моющих средств, т.е гаптенами. Основными АПК при контактной гиперчувствительности являются дендритные клетки кожи – клетки Лангерганса. Реакция контактной гиперчувствительности протекает в 2 стадии: сенсибилизации и проявления. Период сенсибилизации длится около 2-х недель. Гаптен, проникнув в кожу, соединяется с белком. Этот комплекс поглощают дендритные клетки, которые впоследствии презентируют гаптен-белковый комплекс Т-лимфоцитам. В сенсибилизированном организме после повторного контакта с антигеном в течение 48-72 часов происходит миграция Т-лимфоцитов к месту контакта с антигеном и развивается местная воспалительная реакция.
Гиперчувствительность туберкулинового типа. Туберкулин – это фильтрат убитой культуры туберкулезной палочки, содержащий бактериальные антигены. Впервые был получен Р.Кохом.
Реакция гиперчувствительности на туберкулин возникает только у лиц, в организме которых присутствуют живые возбудители туберкулеза. После внутрикожного введения туберкулина к месту введения мигрируют моноциты и сенсибилизированные Т-лимфоциты, которые выделяют цитокины (ФНО-альфа и бета). Цитокины повышают проницаемость сосудистой стенки и в месте введения туберкулина образуется воспалительный инфильтрат, который достигает максимальных размеров через 48 часов.
Гранулематозная гиперчувствительность. Гранулематозные реакции развиваются в тех случаях, когда инфекционный агент остается жизнеспособным в макрофагах, например, при туберкулезе и проказе. Активированный макрофаг, внутри которого находятся живые возбудители, трансформируется в эпителиоидную клетку, которая активно продуцирует цитокины - ФНО. Эпителиоидные клетки сливаются друг с другом, образуя гигантские клетки Лангганса. В центре гранулемы располагаются эпителиоидные клетки, клетки Лангганса и макрофаги. Центр гранулемы окружают Т-лимфоциты. Кнаружи от Т-лимфоцитов находится зона пролиферирующих фибробластов, которые отграничивают зону воспаления от здоровых тканей.
В КМ формир-ся ранние предшественники Т-лимфоцитов. Раньше других Т-клеточных маркеров на поверхности развивающихся клеток Т-ряда человека экспрессируется (уже на стадии проТ) CD7. Эти клетки несут также мембранный маркер CD38, свойственный многим кроветворным клеткам на промежуточных этапах развития. Их размножение поддерж-ют фактор стволовых клеток и ИЛ-7, рецепторы которых присутствуют поверхности этих клеток. Пролиферация клеток может быть вызвана ИЛ-3, 2, 9, 1 и 6. На ранних этапах незрелые бластные предшеств попадают в тимус. Все этапы диф-ки будут связаны с изменением поверхностных маркеров для т-лимфоцитов.
Т-лимфоциты – CD2+ CD3- CD4- CD8-
С начала синтезир-ся β-цепь, затем α-цепь. Происходит сборка цепей и на пов-ть выходит αβTCR CD3+ CD4+ CD8+ - кортикальные тимоциты. Чувствит. К апоптозу, кот. индуцир. кортикостероиды и и.и.
С этого мом-та начин-ся этапы положит. и отрицат. селекции Т-лимфоцитов в тимусе. Положит селекция – процесс избирательного поддержания клонов лимфоцитов, отрицат селекция – процесс устранения клонов лимфоцитов. Эти процессы приводят к коррекции первичного антигенраспознающего комплекса (поддержание клонов, кот распознают пептиды в составе «своих» мол-л МНС, и устранение полностью аутореактивных клонов).
Более ранняя по времени положит. селекция осущ-тся в глубоких слоях коры тимуса. Ее основой служит взаимодействие тимоцитов с эпителиальными клетками, несущими на поверхности молекулы МНС II класса. На этом этапе поддерживаются клоны, способные распознать как полностью аутологичные комбинации молекул МНС и пептидов, так и аутологичные молекулы МНС, модифицированные чужеродными пептидами. Основой положительной селекции является контактное взаимодействие клеток вследствие комплементарности рецептора тимоцита и молекулы МНС эпителиальной клетки. В этом взаимодействии участвуют уже упоминавшиеся пары адгезивных молекул, стабилизирующие взаимодействие.
После осущ-ия фазы положит. отбора на пов-ти кл-к выживших клонов усилив-ся экспрессия CD3-TCR и вспомогат-ых мол-л CD4 и 8. Кл-ки, претерпевшие такие измен-ия, становятся субстратом для отрицат. селекции . Она осущ-ся в мозговом слое и кортико-медуллярной зоне тимуса в процессе взаимод-ия с дендритными кл-ами, богатыми продуктами МНС I и I классов. Если распознают высокоафинно собств. пептиды – ауто АГ – то уничтожаются путем апоптоза.
В рез-те 2 фаз отбора элиминируются те клоны тимоцитов, которые несут рецепторы, специфичные к АГ, не имеющим никакого отношения к аутологичным МНС, а также к комплексам аутологичных АГ-ых пептидов с аутологичными МНС.
Субпопуляции Т-лимфоцитов, основные функции. Т-хелперы, классификация, механизмы дифференцировки. Роль в развитии иммунного ответа Тх1, Тх2, Тх17 и регуляторных Т-лимфоцитов.
Лимфоциты, попадая из КМ в тимус, дифференцируются под влиянием тимических гормонов в зрелые лимфоциты. При этом они проходят разные стадии развития. Существуют 2 основные субпопуляции Т-лимфоцитов:
– Т-хелперы αβТСRCD4+ - субпопуляция =60%. В зав-ти от того, какие цитокины продуцир-ся этими лимфоцитами в ходе развития имм. ответа выделяют: Т-хелперы 1-го типа – продуцируют γ-интерферон, интерлейкин-2, ростовой фактор β. Они активируют макрофаги, участвуют в клеточном имм. ответе, принимают участие в воспалении, в реакциях ГЗТ; Т-хелперы 2-го типа – продуцируют интерлейкин-4,5,10,21,23. способны активировать В-лимфоциты, т.о. отвечают за развитие спец. гуморальных имм. реакций, осущ-ют защиту против гельминтов, парзитов, способств. реализации всех аллергич р-ций в орг-ме; Т-хелперы 17 – продуцир-ют интерлейкин-17,36, интерлейкин-17A, F – вовл. в развитие аутоимм. заболеваний, обеспечив. защиту против бактерий, кот имеют внеклеточный цикл размножения.
Все лимфоциты формируются из наивных Т-лимфоцитов. Дифференцировку обуславливает локальное микроокружение и цитокины, кот. влияют на дифф-ку.
Для Тх1 – Интерлейкин-12, Тх2 – интерлейкин-4, Тх-17 – интерлейкин-6,23. Трегулят – трансформир. ростовой фактор β.
– Цитотоксические лимфоциты – киллерные кл-ки αβТСRCD8+ =30%.
Осуществляют распознавание и уничтожение чужеродных или собственных измененных клеток. Кл-ки-предшественники Т-киллеров распознают АГ на пов-ти кл-ок в ассоциации с мол-ами МНС I-го класса. Секретируют перфорины, гранзимы, ФНО, кот вызывают повреждение мембраны и гибель кл-ки. Тк способны синтезировать интерферон альфа, обладающий противовирусной активностью.