Бактерия Helicobacter pylori приводит к развитию неприятных ощущений и дискомфорту. Обитает она в отделе кишечника, расположенном между желудком и 12-перстной кишкой. Сами по себе бактерии не выживают на воздухе. Если количество бактерий становится очень большим, развивается заболевание хеликобактериоз. При нем могут появиться , гастриты, .
На наличие бактерии может происходить разными способами. Одним из самых эффективных является исследование кала.
Способы анализа кала на Хеликобактер пилори
Есть несколько основных способов:
- метод ПЦР;
- культуральный анализ;
- иммунологический.
Метод ПЦР
Это разновидность молекулярно-генетической диагностики, позволяющий выявить бактерию даже при небольшом количестве в биоматериале фрагментов ДНК. Особенность метода заключается в многократном умножении анализируемого образца возбудителя болезни.
Для проведения исследования требуется особое сочетание, которые получается за счет искусственного синтеза фрагментов ДНК. Во время такой манипуляции происходит наращивание цепочки ДНК, если бактерия присутствует в организме.
Во время исследования соблюдаются определенные температурные режимы, кислотность. Для ускорения реакции осуществляется несколько десятков циклов.
Культуральный
По сути, это бактериологический посев. Во время исследования биологический материал помещается в особую среду. После определенного количества времени ее изучают под микроскопом.
Чтобы определить бактерию, используют специальные техники окрашивания.
При необходимости возможно провести тест на выявление действия антибиотиков на Хеликобактер пилори.
Это положительно сказывается на скорости выздоровления и эффективности проводимой терапии.
Иммунологический
При появлении возбудителя в организме активно начинают вырабатываться антитела. Анализ позволяет выявить их наличие в биоматериале за счет возможности слипания с антигенами. Во время исследования антитела с метками соединяются с анализируемым образцом кала.
Особенность этого метода заключается в возможности получения ложноположительного результата. Поэтому его назначают до проведения инструментальных методов исследования.
Показания
Исследование кала проводится при:
- и язвах желудка,
- атрофии слизистых оболочек.
Техника выполняется и для изучения эффективности контроля назначенных антибактериальных препаратах. Все эти показания являются прямыми к проведению ПЦР.
Культуральный анализ чаще назначается для определения чувствительности патогенной микрофлоры к назначенному лечению. Поскольку этот метод более дорогой, результаты становятся известными через неделю, для выявления Хеликобактер пилори назначается не всегда.
Показаниями к иммунологическим методам являются признаки патологий ЖКТ, генетическая предрасположенность к , железодефицитная анемия и при инфицировании ближайшего окружения.
Каковы преимущества и недостатки молекулярной диагностики?
К достоинствам анализа ПЦР относится возможность прямого определения возбудителя.
Он позволяет уточнить наличие бактерии и ее количество. Отличается метод и высокой специфичностью, поскольку при анализе выявляется уникальный фрагмент ДНК.
К достоинствам относится:
- высокая чувствительность;
- хорошая скорость получения результата;
- возможность использования техники у детей и беременных женщин.
Поскольку весь процесс анализа биоматериала автоматизирован, уменьшается вероятность человеческой ошибки в процессе исследования. Диагностическая ценность метода достаточно высокая.
Для проведения анализа не требуется проникновения или использования инвазивных методов. Процедура сбора биоматериала технически простая, не причиняет угрозы здоровью пациента.
К недостаткам относится тот факт, что отрицательный результат не исключает наличие в организме бактерии.
Поэтому результаты ПЦР не могут быть окончательными. Кроме этого, показатель чувствительности более низкий по сравнению с исследованием образца ткани и клеточной массы.
Подготовка
За трое суток до сбора биоматериала необходимо отменить прием антибиотиков, различных слабительных средств и ректальных свечей. Если сделать это невозможно, потребуется консультация доктора.
Сбор материала происходит в стерильную банку из стекла. Возможно использование пластиковых контейнеров, которые продаются в аптеке вместе со специальной ложечкой.
Доставить материал следует быстро в первые сутки после получения. Хранить тару до момента сдачи нужно при температуре в 3-9 градусов.
При проведении исследования для определения эффективности антибактериальной терапии, повторный анализ назначается примерно через 4 недели. На более ранних сроках он может показать недостоверный результат.
Где сдать?
Пройти можно как в частных лабораториях, так и в медицинских центрах, обычных поликлиниках. Стоимость услуги зависит от выбранной техники.
Лучше всего остановить свой выбор на лицензированных учреждениях. Тогда велика вероятность, что результат окажется достоверным, а само исследование биоматериала будет проведено по всем правилам.
Расшифровка результатов и показатели нормы
В цифрах результат анализа не дают. Он может быть отрицательным или положительным. Анализ предполагает качественную и количественную оценку бактерий в биоматериале. Есть 4 стадии роста бактерий:
- Первая. В благоприятной среде рост бактерий осуществляется слабо, а в твердой – не выявляется.
- Вторая. Размножение и рост микрофлоры доходит до 10 колоний.
- Третья. Отличается прирост колоний до 100 в твердой среде.
- Четвертая. Рост бактерий очень большой.
Последние две стадии говорят о серьезном воспалительном процессе. При этом наличие Хеликобактер пилори в кале не может прямо указывать на какое-то заболевание.
Цена
Дороже всего будет стоить ПЦР с генотипированием, простой ПЦР обойдется в два раза дешевле (около 600 рублей). Остальные анализы обойдутся в 400-800 рублей.
После проведения анализа результаты следует показать врачу общей практики или гастроэнтерологу. Они смогут назначить правильное лечение, при необходимости определят чувствительность бактерии к различным видам антибиотиков.
[09-053 ] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]
1025 руб.
Заказать
Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.
Синонимы русские
Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].
Синонимы английские
H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Биоптат, кал.
Общая информация об исследовании
H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.
H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.
Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.
На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.
Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.
Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.
Для чего используется исследование?
Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:
- атрофического или антрального гастрита;
- язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.
Когда назначается исследование?
- При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
- При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат:
- текущая H. pylori-инфекция;
- H. pylori-инфекция в анамнезе.
Отрицательный результат:
- отсутствие H. pylori-инфекции.
Что может влиять на результат?
- Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
- Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Важные замечания
Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.
Синонимы русские
Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].
Синонимы английские
H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Биоптат, кал.
Общая информация об исследовании
H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.
H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.
Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.
На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.
Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.
Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.
Для чего используется исследование?
Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:
- атрофического или антрального гастрита;
- язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.
Когда назначается исследование?
- При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
- При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат:
- текущая H. pylori-инфекция;
- H. pylori-инфекция в анамнезе.
Отрицательный результат:
- отсутствие H. pylori-инфекции.
Что может влиять на результат?
- Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
- Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Важные замечания
Хеликобактер пилори относится к числу самых опасных для человека бактерий. Патогенный микроорганизм способен провоцировать серьезные отклонения в функциональном состоянии пищеварительного тракта и организма в целом. Бактерии данного типа отличаются повышенной устойчивостью к многочисленным факторам.
Результат терапии напрямую зависит от правильно составленной схемы лечения. Для определения чувствительности микроорганизмов к определенным видам антибактериальных препаратов используются специальные анализы каловых масс. Каждая методика имеет свои достоинства и недостатки. Для получения точных результатов рекомендуется провести несколько тестов.
Пилори длительное время присутствует в организме бессимптомно. Признаки нарушения функционального состояния желудочно-кишечного тракта проявляются только при активной жизнедеятельности бактерий. Одним из основных провоцирующих факторов является снижение иммунитета.
При наличии у пациента определенных заболеваний или отдельных симптомов процедура анализа на становится обязательной.
Показания к анализу:
- проведение антибактериальной терапии (для контроля результатов лечения);
- эрозии и ;
- симптомы нарушения функционального состояния пищеварительного тракта (регулярные или , болевые ощущения различной локализации);
- генетическая предрасположенность к заболеваниям, провоцируемым (злокачественные опухоли органов пищеварения, хронические патологии пищеварительного тракта);
- прогрессирующая атрофия слизистых оболочек желудка;
- регулярные после употребления пищи;
- железодефицитная анемия;
- резкое снижение массы тела в сочетании с другими симптомами отклонений в функциональном состоянии пищеварительного тракта;
- наличие крови в рвотных или каловых массах;
- выявленные новообразования и полипы в пищеварительной системе;
- язва пищевода или гастроэзофагеальный рефлюкс.
2. Как правильно сдавать анализ?
Проведение процедуры исследования каловых масс на наличие патогенных бактерий подразумевает соблюдение ярда правил. Если подготовка к анализу или сбор биологического материала будут совершены неправильно, то результаты тестов могут показать ложный результат. Каловые массы имеют определенный срок хранения. Если материал будет доставлен в лабораторию с нарушением сроков, то тестирование также может стать недостоверным.
Подготовка к сдаче анализа
Подготовительные меры для анализа кала на включают в себя рекомендации по соблюдению определенного режима питания, а также корректировку медикаментозной терапии (при ее наличии). Если прием назначенных препаратов временно прекратить не получается, то данный нюанс обязательно сообщается врачу.
Подготовка тары
Стерильную емкость для сбора биологического материала можно приобрести в аптеке. При покупке такой баночки исключается наличие загрязнений. В качестве альтернативы можно использовать другие варианты тар (например, емкости от детского питания). Важным нюансом является их стерильность. Емкости должны быть максимально очищены от любых видов загрязнений.
Сбор материала
Запрещено собирать каловые массы с памперса или из унитаза. Идеальным вариантом является забор биологического материала из горшка или с полиэтиленового пакета. Емкость для хранения кала должна быть заполнена на одну третью часть. К таре обязательно прикрепляется заполненное направление.
Как и сколько можно хранить материал?
Емкость с каловыми массами доставляется в лабораторию как можно быстрее. Если возможность быстро направить материал для анализа отсутствует, можно воспользоваться двумя вариантами хранения. В первом случае каловые массы однократно замораживаются. Во втором - хранятся не более двух суток при температуре не выше 4 градусов.
3. Тактика определения бактерии хеликобактер с помощью анализа кала
Назначением конкретного анализа на занимается врач. Специалист учитывает индивидуальную клиническую картину состояния здоровья пациента. Сдать анализы на можно самостоятельно, если возникают подозрения на функциональное отклонение пищеварительного тракта.
Молекулярная диагностика
При молекулярном анализе выявляется специфическая ДНК бактерии. Код дублируется на специальном аппарате. При достижении бактерией нужного размера, ее сравнивают с этанолом. Если части ДНК совпадают с оригиналом, то результат теста положительный ( выявлен). Методика отличается высокой степенью информативности.
Культуральный анализ
Бактериальный посев (или культуральный анализ) относится к категории микробиологических методов исследований. В процессе поведения процедуры биологический материал помещается в среду, которая является максимально благоприятной для размножения патогенных микроорганизмов. Через неделю каловые массы изучаются с помощью микроскопа.
Для идентификации учитываются окраска бактерий и их способности вступать в определенные реакции.
Особенности методики:
- процедура позволяет выявить патологический антиген;
- в процессе изучения биологического материала проводится тест на чувствительность к антибактериальным препаратам;
- результаты исследования позволяют подобрать максимально эффективную схему терапии.
Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом
Главной целью проведения иммунологических тестов при выявлении является определение комплексов антиген + антитело. Для исследования используются помеченные антитела. Вступая в реакцию с калом, такие вещества подвергаются определенным изменениям. Антитела способны определить наличие в каловых массах не только патогенные бактерии, но и их части, а также продукты жизнедеятельности.
Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики
ПЦР-диагностика имеет ряд достоинств и недостатков. Некоторые виды патогенных бактерий можно выявить только с помощью данной методики (например, цитотоксичные типы микроорганизмов). Сбор материала для анализа не подразумевает причинение боли или дискомфорта пациенту. Процедура показывает максимально достоверные результаты.
Преимущества методики:
- процедура позволяет выявить различные штаммы патогенных бактерий;
- метод отличается высокой степенью чувствительности;
- анализ безопасен для пациента (для сбора материала не применяются медицинские инструменты);
- неинвазивность и простота процесса забора биологического материала;
- высокая степень специфичности теста;
- метод позволяет определить не только спиралевидные, но и кокковые типы бактерий.
Высокая степень чувствительности теста является его одновременным достоинством и недостатком. Анализ с точностью определяет наличие бактерий, но при загрязнениях биологического материала или тары, результаты процедуры могут быть ложноположительными.
Для исключения ложных показателей следует соблюдать все правила сбора каловых масс для проведения их исследования.
Другие недостатки:
- относительно высокая цена процедуры;
- отсутствие возможности определить чувствительность бактерии к антибактериальным препаратам;
- более низкий показатель чувствительности в сравнении с процедурой исследования биоптата слизистой оболочки желудка.
Анализ кала на антиген хеликобактер пилори инвитро
Процедуры исследования каловых масс осуществляются вне организма пациента («ин витро» - «в стекле», «в пробирке»). Для обнаружения микроба такие методы являются максимально точными и эффективными. Однако процедуры имеют некоторые недостатки. Некоторые процессы, происходящие в человеческом организме нельзя воссоздать искусственным способом.
Анализы могут показать уровень чувствительности бактерий к определенным антибиотикам, но стопроцентной информативности такие тесты не дают.
4. Расшифровка результатов
Процедура | Уровень достоверности результатов | Расшифровка результатов исследования |
Положительный - выявлен хеликтобактериоз; отрицательный - не выявлено ни одного типа |